Новые подходы для исследования культуры клеток

Среди различных «-омик», методов количественного определения молекул по их важности для живых организмов, метаболомика частично служит интересам мониторинга здоровья и продуктивности клеточных культур. Метаболомика предлагается как способ получения мгновенной картинки состояния культуры клеток, отражения всей существующей в данный момент биологической активности, включая экспрессию генов, активность протеинов и энзимов, регуляцию/дизрегуляцию.

 

Помимо методик изучения метаболитов с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР), существуют также методики анализа классов метаболитов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ВЭЖХ/МС). Методика компании Agilent позволяет отслеживать как появление метаболитов, так и потребление компонентов среды: оба фактора являются определяющими для здоровья клеток. 

 

 

Улучшения в ВЭЖХ/МС.

 

Протеомика, липидомика и геномика концентрируются на одном типе молекул, что часто упрощает неким образом отделение аналитов от всего остального. Метаболомика же имеет дело с неизвестным спектром концентраций, усложненным разнообразием молекул. Это дополняется широким, непредсказуемыми взаимодействием между молекулами, матричным эффектом образцов, временами удержания анионных метаболитов и образцов с высокой концентрацией солей.

 

Для таких образцов Agilent разработал ВЭЖХ/МС метод, основанный на Poroshell HILIC-Z колонках дочерней компании InfinityLab с полиэфирэфиркетонной (PEEK) фазой, обеспечивающий надежную чувствительность и воспроизводимость времени удержания для образцов с высокой концентрацией солей. Колонка позволяет за один проход разделить анионные и гидрофобные метаболиты, а также использоваться для мониторинга биопроизводственных процессов.

 

Jordy Hsiao, научный сотрудник Agilent, объясняет: «Высокая концентрация солей это основная проблема, поскольку такие образцы вызывают сдвиг времени удержания и могут менять интенсивность сигнала в жидкостной хроматографии гидрофильных взаимодействий (HILIC)». Методика Agilent использует медроновую кислоту как добавку для устранения этих эффектов.

 

С полным текстом статьи автора Angelo DePalma ресурса Biocompare можно ознакомиться по следующей ссылке:

https://www.biocompare.com/Editorial-Articles/356236-New-Approaches-for-Cell-Culture-Profiling/